​基因编辑技术CRISPR俨然已成为生命科学领域最耀眼的“明星”之一，自问世以来可谓是红得发紫，在治疗癌症、艾滋病、失明、免疫缺陷病症等疾病方面被寄予厚望。然而，5月30日发表在《Nature Methods》上题为《Unexpected mutations after CRISPR-Cas9 editing in vivo》的文章表明，CRISPR技术面临的“脱靶效应”可能远超人们此前的估计，其安全性遭到质疑。

CRISPR是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞（包括iPS）的特定的基因组位点上进行切割、修饰。Rudolf Jaenisch研究组将Cas9与Te1和Tet2特异的sgRNA共注射到小鼠的受精卵中，成功得到双基因敲除的纯合子小鼠，效率高达80%。他们将Cas9/sgRNA与带突变序列的引物共注射，能准确在小鼠两个基因引入所要的点突变。在ES细胞中，他们更是成功地一次敲除了五个基因。与ZFN/TALEN相比，CRISPR/Cas更易于操作，效率更高，更容易得到纯合子突变体，而且可以在不同的位点同时引入多个突变。但该系统是否有脱靶效应尚需进一步的研究。

所谓“脱靶效应”，简单来说，就是编辑了“预想之外”的基因，带来各种不可控的不良后果。而美国科学家通过全基因组测序发现，CRISPR技术能引起基因组内大量非靶标区的基因突变，包括1500多种单核苷酸突变和100多种大片段序列的敲入和敲除。

该研究中，科学家们对先前经受过CRISPR基因编辑的小鼠进行了全基因组测序。他们希望查找CRISPR引起的所有突变。结果发现，CRISPR确实成功纠正引发失明的基因，但两只接受了基因治疗的小鼠的基因组中存在超过1500个单核苷酸突变以及超过100处更大片段的缺失和插入。需要强调的是，这些DNA突变都没有被计算机算法预测出来。

该研究的共同作者Stephen Tsang博士说：“我们认为这是至关重要的。科学界应该考虑由CRISPR导致的所有脱靶突变（包括单核苷酸突变和基因组非编码区域的突变）的潜在危害。我们希望，这一研究结果能够鼓励其他人使用全基因组测序作为确定CRISPR技术所有脱靶效应的方法，从而达到更安全、更精准的基因编辑。”

（环球医学编辑：常 路 ）