一、皮肤病理学常用的特殊染色

皮肤组织标本最常用苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin stain, HE），细胞核染成蓝色，细胞质、胶原、神经组织等染成红色。HE染色可以满足大部分皮肤疾病的组织病理学诊断要求，但当需要确定某些特殊物质、病原体等的性质时，则应该进行特殊染色。

1.淀粉样物质（amyloid stain）

淀粉样蛋白在HE染色为有裂隙的无定形嗜伊红均质物，裂隙是由于制片过程中淀粉样蛋白收缩所致。淀粉样蛋白常用刚果红和甲紫染色，刚果红染色见砖红色团块状物质（图1），于偏振光下呈苹果绿色。甲紫染成紫红色。

图1 刚果红染色

2.黏液染色（mucin stain）

皮肤组织在某些生理或病理情况下黏液样物质增多，根据其所含有酸基的不同，分为中性、酸性和混合性黏多糖。皮肤组织中主要为酸性黏多糖。临床诊断过程中多用阿新蓝（alcian blue）和胶样铁（colloidal iron）染色显示酸性黏多糖，表现为真皮胶原束间蓝色的云雾状物质（图2）。

图2 阿新蓝染色

3.肥大细胞染色（mast cell stain）

肥大细胞来源于真皮未分化的间充质细胞，呈梭形、立方形或纺锤形。细胞质中有异染性嗜碱性颗粒，HE染色不显色。用吉姆萨染色或甲苯胺蓝染色（toluidine blue）可见细胞内异染的紫红色颗粒（图3）。

图3 甲苯胺蓝染色

4.糖原染色（glycogen stain）

过碘酸-希夫（PAS）染色是最常用的皮肤组织糖原染色方法，常用于真菌感染及皮肤糖原含量增多性皮肤病的诊断（图4）。

图4 PAS染色

5.弹力纤维染色（elastic fibers stain）

弹力纤维缠绕在胶原束之间，由含有丰富二硫键的弹性蛋白组成，经Verhoeff-Van Gieson染色呈棕黑色（图5）。

图5 弹力纤维染色

6.黑素染色（melanin stain）

黑素颗粒存在于表皮的基底部位，在某些病理情况下，黑色素分布异常可以用Fontana-Masson染色来显示，呈棕黑色（图6）。

图6 Fontana-Masson染色

7.抗酸染色（acid-fast bacillus stain）

结核、麻风等抗酸杆菌感染时需用抗酸染色以确诊。由于菌体含有糖脂的蜡质外壳与苯酚碱性复红形成的复合物，抗酸脱色致杆菌被染成红色（图7）。

图7 抗酸染色

8.铁染色（iron stain）

临床应用普鲁士蓝染色（Perls stain）来区分黑色素和含铁血黄素，后者的铁离子和普鲁士蓝反应呈深蓝色（图8）。

图8 Perls染色

9.细菌染色（bacteria stain）

Brown-Hopps染色法将革兰氏阳性球菌染成蓝色，阴性杆菌染成红色（图9）。

图9 Brown-Hopps染色

10.真菌染色（fungi stain）

常用的真菌染色包括PAS以及六胺银（Gomori's methenamine silver nitrate stain, GMS）染色。GMS染色将真菌细胞壁染成灰黑色（图10）。

图10 GMS染色

11.螺旋体染色（spirochete stain）

常用的螺旋体染色包括Warthin-Starry银染色及Steiner染色，常用于临床梅毒及莱姆（Lyme）病的病原体检测（图11）。

图11 Steiner染色

二、皮肤病理学常用的免疫组织化学染色

免疫组织化学又称为免疫细胞化学，是应用带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等进行定位检测的方法。在皮肤病理研究中，主要用于皮肤肿瘤组织类型和细胞来源的鉴别，包括恶性黑素瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤以及神经源性肿瘤。皮肤免疫组织化学染色常用的抗体包括针对上皮组织（epithelial markers）、间叶组织（mesenchymal markers）、神经外胚叶组织（neuroectodermal markers）及造血组织（hematopoietic markers）等的标志物。

1.上皮组织标志物

皮肤病理学诊断常用的上皮组织标志物包括角蛋白（cytokeratin, CK）、上皮膜抗原（epithelial membrane antigen, EMA）及癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）等。

（1）角蛋白：是最复杂的中间丝蛋白家族成员，存在于所有的上皮细胞。角蛋白包括20余种蛋白成分，分为酸性和碱性角蛋白亚家族，也可根据其表达于复层或单层上皮进行分类。根据分子量不同分为低分子量（CK8，CK18，CK19）和高分子量角蛋白（CK1，CK5，CK10，CK14），通常用于上皮和非上皮来源肿瘤的鉴别。皮肤组织病理学诊断常用的检测角蛋白的标志物包括角蛋白（Pan CK），CK7，CK20，CAM5.2，AE1/AE3等（图12）。

图12 Pan CK

（2）上皮膜抗原（EMA）：属于人类黏蛋白家族，存在于人体各种上皮细胞中，其分布与角蛋白相似。EMA可作为上皮源性肿瘤的标志物，阳性表达于鳞癌、胃肠道腺癌、乳腺癌、前列腺癌等。EMA对内脏上皮源性肿瘤的敏感性优于表皮源性肿瘤，同样在腺癌中的表达高于鳞癌。皮肤组织病理学诊断中常用于皮脂腺，汗腺肿瘤的标记，佩吉特病和乳腺外佩吉特病可阳性表达（图13）。

图13 EMA

（3）癌胚抗原（CEA）：为存在于结肠癌及胚胎结肠黏膜上皮细胞的一种糖蛋白，由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝细胞所合成。在妊娠前6个月内CEA含量增高，出生后血清中含量低下。作为常用的肿瘤标志物，CEA升高常见于肺、消化道及胰腺来源的肿瘤。皮肤组织病理学诊断中常用于汗腺肿瘤，佩吉特病和乳腺外佩吉特病以及腺癌的标记（图14）。

图14 CEA

2.间叶组织标志物

皮肤病理学诊断常用的间叶组织标志物包括波形蛋白（vimentin），平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin, SMA），CD34，CD31，结蛋白（desmin）以及Ⅷ因子相关抗原等（图15）。

图15 CD34

3.神经外胚层组织标志物

皮肤病理学诊断常用的神经外胚层组织标志物包括S-100，HMB-45，melan A/mart-1及SOX10等（图16）。

图16 S-100

4.造血组织标志物

皮肤病理学诊断常用的造血组织标志物包括CD45Ra（LCA）、CD45Ro、CD20、CD3、CD4、CD8、CD5、CD30（Ki-1/BERH2）、CD7、CD56、CD68、kappa/lambda、CD1a及BCL-2等（图17，图18）。

图17 CD20

图18 CD1a

5.细胞增殖性标志物MIB-1（Ki-67）

为分子量360KD的核抗原，表达于任何进入增殖期的细胞，因而可用于对肿瘤良恶性的鉴别（图19）。

图19 Ki-67